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密度梯度分离 > 即用型分离液

人  单个核细胞  淋巴细胞  骨髓  脐带血  外周血  

Lymphoprep

品牌：Serumwerk Bernburg AG

储存：4度-30度，无菌，避光

货号规格价格货期
1856250mL493  4443-5天
1856-4x250ML4x250mL1920  17283-5天
1858500mL634  571现货
1858-6x500ML6x500mL3780  3402现货

详细说明

Lymphoprep

Isolation of human mononuclear cells/用于人单个核细胞的分离

Arne Bøyum 博士于 1968 年报道了一种从人血液中分离单个核细胞的简单有效的方法，Lymphoprep基于这一方法，广泛用于分离这些细胞已经超过了45 年。单个核细胞（单核细胞和淋巴细胞mononuclear cell/MNC）的浮力密度低于红细胞和多形核白细胞 (polymorphonuclear/PMN，也称之为granulocytes粒细胞）。 绝大多数单个核细胞的密度低于 1.077 g/ml。 因此，可以通过在密度为 1.077 g/ml 的Lymphoprep等渗溶液上离心来分离这些细胞，这允许红细胞和 PMN 通过Lymphoprep沉淀，同时将单个核细胞保留在样品/Lymphoprep界面。

为了获得最大产率，重要的是在离心之前，要用生理盐水将血样1:1稀释。

操作步骤：

1、保证Lymphoprep分离液的温度在15度-25度。

2、在含有抗凝剂（EDTA、heparin、或ACD）的管子内收集血液，或者用去纤维蛋白的血液。此处抗凝剂的选择取决于得到淋巴细胞以后，后续实验的要求，一般选取EDTA即可。

3、去掉瓶盖，将瓶子颠倒几次，以保证瓶子内溶液均匀。

4、按下述方法用注射器或移液器吸出Lymphoprep分离液：

    移去瓶子上的蓝色盖子。

    注射器：将瓶子倒过来至合适的角度，注射器针头扎过橡胶瓶盖，吸取所需体积的Lymphoprep分离液。

    移液器：

5、按照下表用等体积的0.9%的NaCl溶液（即生理盐水）或等渗透压的PBS及培养基稀释血液。

血液(mL)
稀释液 (mL)
Lymphoprep(mL)
离心管(mL)
1
1
1.5
5
2
2
3
14
3
3
3
14
4
4
4
14
5
5
10
50
10
10
15
50
15
15
15
50

6、小心地将稀释后的血液铺加到离心管里面的Lymphoprep分离液上面，注意尽量不要将血液和分离液的界面混了。此处铺层可以采用从上面铺，或从下面铺两种方法。铺层的关键是不能让血液和分离液混在一起，要界面分层清晰。

7、在室温下（15 - 25°C，最好20°C），用水平转子离心机，800g的离心力，离心20分钟。（如果血液存放时间超过2小时——从人体抽出算起，离心时间延长为30分钟）。

8、离心前和离心后，离心管内液体分层如图所示。离心后，离心管内位于血浆和分离液界面处的明显白色的一层即为淋巴细胞层。  

9、用移液管直接吸取淋巴细胞层，注意，不要去除上面的血液层，而是直接吸取。移至另一离心管中。

10、用大约2倍体积的0.9%的NaCl溶液（生理盐水）或PBS稀释收集到的淋巴细胞，在250g-300g的离心力下，离心10分钟，（此处在加上稀释液后的体积在15ml离心管内不宜超过5-6ml，体积过大，会降低淋巴细胞的产率），收集沉淀，即得到所需的人外周血单个核细胞，即可用于后续的实验。

结果如上图：

对于大多数正常人和病人的外周血、脐带血、及骨髓样本，Lymphoprep都能够快速、简单、可靠地得到优异的分离效果。
获得的单个核细胞悬浮液中红细胞的污染通常在总细胞数的 1-5% 之间。
在密集的免疫抑制治疗期间，一些未成熟的中性粒细胞可能会与淋巴细胞在一起。
使用肝素纳抗凝血时，必须去除大部分血小板，以避免细胞毒性试验中的抑制作用。

特点：

Lymphoprep 按照 GMP 和 ISO13485 制造、包装和出售。

Lymphoprep 与来自其他制造商的昂贵的Ficoll-Paque具有相同的指标，无需改变任何操作条件，就可以替代Ficoll-Paque。

Lymphoprep和Ficoll-Paque分离效果对比

Lymphoprep 可用于制备用于组织分型、抗淋巴细胞血清和免疫学研究的纯淋巴细胞悬液。

Lymphoprep 是即用型的（ready-to-use）、无菌的和内毒素检测的，具有如下指标的溶液：

Sodium diatrizoate
9.1% (w/v)
Polysaccharide
5.7% (w/v)
密度
1.077 ±0.001 g/ml
渗透压
290 ±15 mOsm
内毒素
< 1.0 IU/ml

每批次Lymphoprep 的内毒素水平都使用特定的 LAL 测试检查。我们的目标是生产的每个批次，内毒素水平都低于或等于 0.13 IU/ml 。

注意事项：

操作过程中，铺血液到分离液上面时，保持分离液和血液界面清晰对分离效果很关键，所以要细心、慢慢的添加血液，如果想操作简便一点，可以购买淋巴细胞分离管，配合使用，用淋巴细胞分离管也可以得到更清晰的单个核细胞层，同时一定程度改善得率。
该分离液适用于人的外周血、骨髓、以及脐带血，一般不适用于动物，据客户反馈，也可以用于分离大鼠外周血单个核细胞（PBMC）。

参考资料：

Bøyum, A. (1968) Separation of leucocytes from blood and bone marrow Scand. J. Clin. Lab. Invest., 21, suppl.97

https://diagnostic.serumwerk.com/wp-content/uploads/2022/11/IFU-LymphoprepV2.pdf

https://cdn.stemcell.com/media/files/pis/10000000358-PIS_07.pdf