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Lympholyte-Mammal哺乳动物淋巴细胞分离液

品牌：CEDARLANE点击下载说明书

储存：未开盖时，室温储存；开盖后，4℃储存。都要避光。

简述：

Lympholyte-Mammal哺乳动物淋巴细胞分离液是专门用于从大多数哺乳动物血液中分离淋巴细胞和单核细胞的密度梯度分离液。无菌，经0.22um过滤。

参数：

成分：Dextran 和Sodium Diatrizoate

密度：1.086±0.001g/cm³  22℃

pH：6.9±0.3

淋巴细胞的得率：40%-50%，红细胞的含量≤5%

储存条件：

未开盖时，室温储存；开盖后，4℃储存。都要避光。

操作步骤：

1、将血液收集在含有抗凝剂的试管中。

Note: 如果在Alsever采集血液，使用 1:1 的比例。1400g 离心10分钟。吸出上清液并丢弃。将沉淀重悬在2倍原始血量的PBS重悬。继续执行步骤3。

2、用同体积的PBS稀释血液（1：1）

3、根据Method A 或Method B，将4mL稀释的血液铺在3mL的Lympholyte®-Mammal 上（见图）。（使用10-15ml 离心管）

Method A：在离心管中加入3ml Lympholyte®-Mammal。使用移液器小心地将4 mL稀释的血液铺在Lympholyte®-Mammal上，在界面处尽可能少的混合（图A）。由于 Lympholyte®-Mammal 的密度比细胞悬液大，因此会形成明显的界面（图C）。

Method B：向离心管中加入4ml 稀释的血液。将一个移液器放在试管底部（图 B）。慢慢地将 Lympholyte®-Mammal添加到吸管中，让重力使其在稀释的血液下分层。继续操作，直到3mL的 Lympholyte®-Mammal铺在稀释的血液下。由于 Lympholyte®-Mammal 的密度大于细胞悬液，因此细胞悬液将在 Lympholyte®-Mammal 上方形成明显的界面（图 C）。

4、室温800g离心20min

5、离心后，界面处会有清晰的淋巴细胞层（图D）。用吸管小心地从离心管中取出细胞并转移到新的离心管中。

6、用培养基或者PBS稀释转移的细胞以降低溶液的密度。以800g离心10分钟以沉淀淋巴细胞，然后弃去上清液。

Note：如果需要，在这一步我们可以去除血小板。

A. 加入 0.5mL缓冲液和 50uL凝血酶，然后轻轻重悬沉淀。

B. 用缓冲液补足10mL并充分混合。

C. 非常缓慢地（100 g）离心细胞3分钟；血小板会聚集并沉降到底部。

D. 抽出上清液（包含细胞）并放入另一个试管中，留下聚集的血小板。

Note：

1、对于缓冲液，您可以使用 PBS，或您在整个Lympholyte Mammal操作中一直使用的任何无血清培养基。

2、凝血酶激活血小板导致结块并在低速离心时易于去除。

或者，

A. 将细胞 (800g) 离心1分钟以沉淀细胞。

B. 倒出上清液并将所得细胞重悬于缓冲液中。

C. 再重复2次。这个时候会观察到，每次这样做时，随着血小板被去除，产生的上清液会变得更加清澈。

7、洗淋巴细胞2-3次