产品


【名称】:Lymphoprep 人淋巴细胞分离液(即用型)

【规格】:10x250ml

【货号】:1116507

【品牌】:Axis-Shield/Alere Technologies AS

【价格】:4158

【说明书】:点击下载

【储存和运输】:4度-30度,无菌,避光。

产品详细介绍

人淋巴细胞分离液Lymphoprep即用型

Lymphoprep是一种无菌、内毒素含量低的即用型分离液,用于分离人外周血单个核细胞(PBMC: Peripheral Blood Mononuclear Cells)(包括单核细胞monocytes和淋巴细胞lymphocytes),具有与昂贵的cytiva/思拓凡(原GE Healthercare)的Ficoll-Paque PLUS或Ficoll-Paque PREMIUM分离液同样的指标。

工作原理

PBMC与血液中的其他成分存在密度差异,利用密度在1.077±0.001g/ml而且等渗的LymphoprepTM溶液作密度梯度离心时,红细胞和粒细胞由于密度大,故沉于分离液底部。PBMC密度稍低于分离液,故位于分离液界面上,从而获得PBMC。LymphoprepTM分离液含有多聚糖(polysacccharide),多聚糖能粘附在红细胞表面,使红细胞聚集,下沉更快。

技术参数

成分:泛影葡胺钠(Sodium diatrizoate):9.1% (w/v);多聚糖:5.7% (w/v)

密度:1.077±0.001g/ml

渗透性:290±15mOsm

内毒素含量:<1.0EU/ml

储存条件

室温,无菌,避光。

使用步骤

第一步

在含有抗凝剂(EDTA、heparin、或ACD)的管子内收集血液,或者用去纤维蛋白的血液。此处抗凝剂的选择取决于得到淋巴细胞以后,后续实验的要求,一般选取EDTA即可。

第二步

用等体积的0.9%的NaCl溶液(即生理盐水)稀释血液。

第三步

在12-15ml的离心管内,将6ml稀释后的血液铺在3ml分离介质Lymphoprep上。

此处铺层可以采用从上面铺,或从下面铺两种方法。铺层的关键是不能让血液和分离液混在一起,要界面分层清晰。

第四步

在室温下——20摄氏度左右,用水平转子,800g的离心力,离心20分钟。(如果血液存放时间超过2小时——从人体抽出算起,离心时间延长为30分钟)。

第五步

离心前和离心后,离心管内液体分层如下图所示。

离心后,离心管内位于血液和分离液界面处的明显的一层即为淋巴细胞层。

用移液管直接吸取淋巴细胞层,注意,不要去除上面的血液层,而是直接吸取。移至另一离心管中。

第六步

用大约2倍体积的0.9%的NaCl溶液(生理盐水)稀释收集到的淋巴细胞,在250g-300g的离心力下,离心10分钟,(此处在加上稀释液后的体积在15ml离心管内不宜超过5-6ml,体积过大,会降低淋巴细胞的产率),收集沉淀,即得到所需的人外周血单个核细胞,即可用于后续的实验。

注意事项:

该分离液适用于人的外周血、骨髓、以及脐带血,一般不适用于动物,据客户反馈,也可以用于分离大鼠PBMC。

使用该分离液时,需将待分离的血液用生理盐水做等体积的稀释。