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Lympholyte-H人淋巴细胞分离液

品牌：CEDARLANE点击下载说明书

储存：未开盖时，室温（22±3摄氏度）保存；开盖后，储存于4摄氏度。但都要避光。

描述:
Lympholyte-H 是一种密度梯度分离介质， 专门用于从人外周血和脐带血中分离活淋巴细胞和单核细胞。
应用:
Lympholyte-H可以通过一种简单的方法从人体血液中去除红细胞和死细胞。Lympholyte-H还能去除大部分粒细胞( 包括中性粒细胞) 。由此高效和非选择性地得到活的由人淋巴细胞和单核细胞组成细胞群。
说明:
Lympholyte-H是一种液体。产品经过0. 22 μ m 过滤。内毒素含量低。

参数：

成分：5.64% Polysucrose 400，9.65% Sodium Diatrizoate

密度：1.077±0.001g/cm³ @22摄氏度

pH：6.9±0.3

分离结果：活淋巴细胞的得率≥70%，剩余红细胞≤10%。

存储:
未开封常温(22±3摄氏度)保存。开封后+4℃保存。始终避光保存。在有效期前使用。

注意:长期储存可能会发生相分离。
使用前摇匀。静置直到没有气泡(2-3 分钟) 。在室温下使用( 密度会随温度而变化)。

使用方法: 
在室温(约22℃)下使用Lympholyte-H 和选择的无血清培养基(磷酸盐缓冲盐水，改良McCoy 's 培养基等)，并无菌操作。
1.在含有抗凝血剂或去纤维血的管中收集人血。
2.用等体积的培养基稀释血液。
3.按方法A或方法B (见图)将稀释后的血液6毫升铺在3毫升Lympholyte-H上面。使用10-15毫升离心管。
方法A: 在离心管中加入3 ml 的Lympholyte-H。使用移液管，小心地将6 毫升稀释的血液分层铺在Lympholyte-H上，在界面处尽可能少地混合( 图a) 。由于Lympholyte-H的密度比细胞悬液大，将形成一个明显的界面(图C)。
方法B: 向离心管中加入6 毫升稀释后的血液。将一个大的(23 厘米)巴斯德移液管置于管底(图B)，慢慢向巴斯德移液管中加入Lympholyte-H，让重力使其在稀释的血液下面分层。继续操作，直到3ml的Lympholyte-H在稀释的血液下面分层。由于Lympholyte-H的密度比细胞悬液大， 细胞悬液会在Lympholyte-H上方形成一层界面明显的层(图C)。
4.室温下，800g 离心20 分钟。
5. 离心后， 界面处会有一层明显可以看到的不透明的淋巴细胞层( 图D) ，使用巴斯德移液管，小心地将细胞从界面中取出，转移到新的离心管中。

6.用培养基稀释移取过来的细胞以降低溶液的密度。800g 离心10 分钟，使淋巴细胞沉降到管底，扔弃上清。
注:如有需要，此时按下述步骤去除血小板:
A.加入0.5 ml 缓冲液和50 ul 凝血酶，然后轻轻重悬沉集的细胞。
B.加入10 毫升缓冲液，充分混合。
C.缓慢离心细胞(100 g)3 分钟;血小板会结块沉淀到底部。
D.提取上清液(含细胞)并置于另一管中，留下聚集的血小板。
另一方法,
A.将细胞(800 克)离心1 分钟，使细胞成粒。
B.倒出上清液，将得到的细胞重新悬吊在缓冲液中。
C.重复2 次。人们会注意到，每次这样做，随着血小板被去掉，上清液越来越透明。

7.在进一步处理之前，将淋巴细胞在培养基中洗涤2-3 次(在此阶段可以使用含血清的培养基)。

备注：Rev JK 01/20