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Histopaque-1077

品牌：Sigma/西格玛点击下载说明书

储存：2-8度

Histopaque-1077已用于

1. 外周血单核细胞（PBMC）以及骨髓单核细胞（BMMC）的分离
2. 通过离心进行单核细胞的纯化
3. 人类淋巴细胞的分离
4. 从全血中进行乳腺癌循环肿瘤细胞（CTC）的分离

产品描述
Histopaque-1077 是一种无菌、经内毒素检测的聚蔗糖及泛影钠溶液，并调整密度至1.077g/mL。 这种即用型溶液可以从小体积的全血中分离得到活性淋巴细胞和其他单个核细胞。Histopaque-1077适用于人淋巴细胞抗原 (HLA) 分型¹，可作为获得T、B 和其它淋巴细胞²之前的初始分离步骤，也可用来制备用于细胞培养和细胞毒性试验的淋巴细胞悬液³.

溶液成分

聚蔗糖/Polysucrose，57 g/L，和钠泛影酸盐/sodium diatrizoate，90 g/L。

参数指标

溶液密度：1.076-1.078 g/ml

内毒素/Endotoxin： <0.3 EU/mL

pH值： 8.8-9.0

注意事项和免责声明
仅供研发使用。 不适用于药物、家用、或其他用途。 请查阅安全数据有关危害和信息的表进行使用操作。
储存/稳定性
将产品储存在 2–8 °C。Histopaque-1077 的有效期为3年。 试剂标签标明有效期。

准备说明
标本采集 - 采集血液不含防腐剂的抗凝剂（EDTA 或肝素）或使用去纤维蛋白的血液。 为了最好结果，血液应在采集后的2小时内。
操作过程

抗凝血铺在Histopaque-1077上面。 在离心过程中，红细胞被聚蔗糖聚集并迅速沉淀。 粒细胞变成轻微的高渗，这会增加他们的沉降速率，导致沉积到离心管底部。淋巴细胞和其他单核细胞留在Histopaque-1077界面。红细胞污染是微不足道。 包含的大多数血小板可通过后面的洗涤步骤低速离心去除。

1. 向 15 mL 锥形离心管中加入3 毫升的 Histopaque-1077 并恢复到室内温度。
2. 小心地将 3 mL 全血铺在Histopaque-1077上面。
3. 400×g 离心在室温下 30 分钟。在较低温度下离心，例如 4 °C，可能会导致细胞结块并且恢复不佳。注意：确保刹车和加速在离心机上处于最低档，急刹车和加速可能影响分层。
4. 离心后用巴斯德移液管小心吸出0.5 厘米高度的不透明的单个核细胞层。丢弃不透明层上面的那部分上清液。
5. 用巴斯德吸管小心转移不透明界面到干净的锥形离心管。
6. 加入10 mL洗涤细胞的等渗PBS/磷酸盐缓冲盐溶液或适当的细胞培养介质并通过轻轻从巴斯德移液管取出吸入进行混合。
7. 250×g 离心 10 分钟。
8. 吸出上清液并弃去。
9. 用 5 mL 等渗PBS/磷酸盐缓冲盐溶液或适当的细胞培养介质重悬细胞沉淀，并通过轻轻从巴斯德移液管取出吸入进行混合。
10. 250×g 离心 10 分钟。
11. 重复步骤 8、9 和 10，丢弃上清液并重悬细胞沉淀在 0.5 mL 等渗PBS/磷酸盐缓冲液中或适当的细胞培养介质中。

结果
红细胞和粒细胞应沉淀至离心管底部。单核细胞应成带在Histopaque-1077 和血浆的界面处。
如果观察到的结果与预期不同，请联系技术支持求助。

参考资料/References

1. Amos, D.B., and Pool, P., “HLA typing” in Manual of Clinical Immunology, Rose, N.R., and Friedman, H., eds., American Society for Microbiology, (Washington, DC: 1976) pp. 797-804.

2. Winchester, R.J., and Ross, G., “Methods for enumerating lymphocyte populations” in Manual of Clinical Immunology, Rose, N.R., and Friedman, H., eds., American Society for Microbiology, (Washington, DC: 1976) pp. 64-76.

3. Thorsby, E., and Bratlie, A., “A rapid method for preparation of pure lymphocyte suspensions.” Histocompatibility Testing, Terasaki, P.I., ed., 665-666 (1970).

备注：10771 Product Information Sheet Rev 12/2021